Capillarys2 si Minicap- cea mai noua generatie de automate de electroforeza capilara SEBIA-Franta


07.01.2010

Capillarys2 si Minicap- cea mai noua generatie de automate de electroforeza capilara  SEBIA-Franta

  Andreea Chiva

 

Electroforeza capilara este o alternativa viabila la electroforeza clasica, in special datorita faptului ca cele mai frecvente interferente cunoscute pentru tehnicile electroforetice (hemoliza, icterul si lactescenta serului, precum si artefactele legate de punctul de aplicare a probelor si prezenta componentelor monoclonale de concentratie scăzuta) raman fara efect asupra electroforezei capilare. Separarea electroforetica a proteinelor din fluidele hipoproteice (lichid cefalorahidian si urina) precum si determinarea cantitativa a hemoglobinei glicozilate în sistem multicapilar constituie perspective importante in dezvoltarea tehnicilor electroforetice in sistem Capillarys.  Desi putin accesibila in prezent, electroforeza capilara se impune ca o metoda de viitor, rapida si mult mai sensibila decat electroforeza in gel de agaroza.

Electroforeza capilara permite separarea moleculelor incarcate electric functie de mobilitatea proprie intr-un tampon cu un pH dat si functie de fluxul electroosmotic. Separarea are loc in capilare de siliciu, cu un diametru mai mic de 100 µm, umplute cu un tampon format din diversi electroliti. Injectia probelor (diluate in prealabil cu tampon) se face la anod prin aspiratie. Separarea se face prin aplicarea unei diferente de potential la extremitatile capliarului. Densitometrarea fractiunilor are loc la catod, la lungimi de unda adecvate tipului de amestec proteic de separat. La final, capliarele sunt spalate cu solutie de spalare si apoi cu solutie tampon...

 

 

 

Avantajele electroforezei capilare:

-gradul mare de rezolutie, specificitate şi sensibilitate

-rapiditatea conferita de posibilitatea analizei simultane a 10 probe/ ora (în cazul imunotiparii) pana la 80 probe/ ora (in cazul proteinelor serice). In termeni de timp vorbim despre 20 minute in electroforeza standard in gel de agaroza si de 120 s in electroforeza capilara

-trasabilitatea totala de la proba primara pana la rezultat, precum si a lotului de reactivi

-implementarea programului de control de calitate pe 3 nivele cu posibilitate de prelucrare statistica a rezultatelor (curba Levey-Jennings) si a programului de transfer a rezultatelor pentru controlul inter laboratoare si a celui de acces la aceste rezultate

-posibilitatea conectarii la un scanner pentru importul si monitorizarea imaginilor obţinute pentru imunofixare (IF) sau a rezultatelor pentru proteine specifice

-diversificarea parametrilor de investigat prin posibilitatea determinarii, cu o rezolutie excelenta,  a sialoformele transferinei si a hemoglobinelor normale (Hb F si A) si patologice (Hb S, C, D, E, Bart) ale noului nascut.

-analiza directa a globulelor rosii nespalate, centrifugate sau decantate, hemoliza fiind efectuata de catre aparat

-eliminarea interferentelor uzuale: hemoliza, icterul si lactescenţa serului, precum si artefactele legate de punctul de aplicare a probelor si prezenta componentelor monoclonale de concentratie scazuta

-costul scazut per analiza

SEBIA- Franta propune doua variante de automate de electroforeza capilara- Capillarys 2 si Minicap cu posibilitatea efectuarii electroforezei de proteine serice si urinare si a hemoglobinei, a imunotiparii (corespondentul imunofixarii de la electroforeza in gel de agaroza) si a identificarii CDT(carbohydrate deficient transferrine)- marker al consumului cronic de alcool.

Electroforeza proteinelor serice permite separarea in tampon alcalin a proteinelor serice in 5 sau 6 fractiuni (albumina, alfa1, alfa2, beta 1/2 si gama globuline). Trigliceridele nu interfera in determinarea fractiunii alfa1, asa cum se intampla la electroforeza in gel.

Imunotiparea permite identificarea si caracterizarea benzilor monoclonale prin utilizarea antiserurilor specifice anti lanturi grele anti gama (Ig G), anti alfa (Ig A), anti mu (Ig M) si anti lant usor kappa si lamda.

Tehnica este simpla. Se dilueaza o mica cantitate de ser cu un diluent specific urmand reactia cu antiserurile specifice pentru formarea complexelor antigen- anticorp. Metoda nu necesita incubare, sedimentare sau centrifugare. Complexele antigen-anticorp formate au o mobilitate electroforetica scazuta, migrand spre anod. Identificarea benzilor monoclonale se face prin compararea aspectului curbei de referinta cu cele corespunzatoare Ig G, A, M, K,L.

Electroforeza hemoglobinei este o alternativa importanta la electroforeza clasica in gel de agaroza prin automatizarea completa, prin posibilitatea citirii codului de bare si prin scaderea considerabila a timpului de obtinere a rezultatului (pentru Capillarys 2- 33 probe/ora si 8 probe/ ora pentru Minicap). 

Avantajele electroforezei hemoglobinei in sistem capilar SEBIA sunt:

-completa automatizare de la prepararea hemolizatului pana la determinarea cantitativa a fractiunilor de hemoglobina si identificarea hemoglobinelor patologioce

-cantitatea mica de proba necesara

-posibilitatea utilizarii cititorului de cod de bare

-rezultate usor de interpretat, fara fractiuni de interferenta

-sensibilitate mare pentru Hb A2, F sau S, rezultate perfect superpozabile  cu cele obtinute pe HPLC (high performance liquid chromatography)

-posibilitatea separarii Hb E de A2, cu posibilitatea identificarii si cauantificarii corecte a celor doua fractiuni

-posibilitatea separarii Hb H de Hb Bart, extrem de importanta in talasemii

-posibilitatea de stocare a curbelor de control Hb AFSC

CDT (carbohydrate deficient transferrine) este considerat cel mai specific marker al consumului cronic de alcool. Valoarea sa diagnostica este mare, de la monitorizarea pacientilor cuprinsi in programele de dezalcoolizare pana la testarea angajatilor din domenii de risc in ceea ce priveste consumul de alcool (constructii, soferi, piloti). De asemenea, CDT este parte integranta din bateria de teste preoperatorii sau post traumatice si in unele afectiuni neurologice.

Avantajele identificarii CDT in sistem capilar sunt:

-automatizarea completa

-timpul scurt de obtinere a rezultatului prin posibilitatea analizei simultane a unui numar mare de probe

-vizualizarea tuturor izoformelor transferinei, inclusiv a variantelor genetice sau a aspectelor particulare intalnite in tulburarile congenitale de glicozilare

Parametru studiat

Fracţiuni separate

 

PROTEINE SERICE

-5 sau 6  (funcţie de pH)

albumina, α1, α2, β (β1-β2), γ globuline

 

PROTEINE SERICE

-electroforeza de înalta rezolutie – 8 fractiuni:

-          albumina

-          β1 globuline

-          β2 globuline

-          γ globuline

-          α2 macroglobulina

-          α1 glicoproteină acida

-          α1 antitripsina

-          haptoglobina

-           

PROTEINE URINARE

-SDS-gel electroforeza (fara concentrare)

-electroforeza de înalta rezolutie

 

HEMOGLOBINE

-separare in mediu alcalin

(Hb A0, Hb F, Hb A2)

 

-separarea hemoglobinelor noului-nascut normale (Hb A şi F)  si identificarea celor patologice (S, C, E, D si Bart)

 

CDT (Carbohydrat deficient transferrin)

-5 fractiuni:

asialo, disialo, trisialo, tetrasialo, pentasialo transferina

 

IMUNOTIPARE

-imunoglobuline serice

Ig G, A, M, lanturi usoare K, L

 

 

  Pentru mai multe informatii accesati sectiunea "Suport stiintific" si "Electroforeza capilara"

 

Noutati


























Actualitati Medicale




















 

Introdu adresa ta de email pentru a te alatura noua.

 
Proiect realizat de AB T&Co              © Toate drepturile rezervate Electroforeza.ro 2009