Aplicatii ale kit-ului Hydragel HR SEBIA Franta pentru determinarea markerilor de degenerescenta neuronala in lichidul cefalorahidian


08.09.2011

 

Aplicatii ale kitului Hydragel HR SEBIA Franta pentru determinarea markerilor de degenerescenta neuronala in lichidul cefalorahidian

 

Andreea Chiva

 

Bolile degenerative ale sistemului nervos constituie afectiuni cu prevalenta mare, in special in randul persoanelor peste 65 ani.

Conform unor statistici de data recenta, boala Parkinson si Alzheimer, cele mai frecvente boli degenerative, afecteaza un numar din ce in ce mai mare de persoane. Astfel, incidenta bolii Parkinson este de 120 cazuri la 100000, in timp ce boala Alzheimer afecteaza aproape 14% din populatia peste 65 ani, procentul crescand la 40% peste 80 ani.

Cercetatorii releva, insa, scaderea progresiva a varstei de debut a acestor boli, ceea ce creste considerabil interesul pentru identificarea unor markeri ai degenerescentei neuronale cu grad mare de specificitate si sensibilitate, indeosebi pentru stadiile incipiente ale bolii.

 

Markeri ai degenerscentei neuronale

Markerii degenerescentei neuronale utilizati in prezent sunt: proteina Tau si Tau fosforilata (ca markeri ai disfunctiei proteice la nivelul sistemului nervos), cistatina  (proteina amiloidogenica) si clusterina (proteina cu rol in prevenirea mortii celulare).

 

Cistatina C este o proteina de 120 aminoacizi, fiind un inhibitor al proteinazelor lizozomale si a cistein proteinazelor. Joaca un rol important in legarea amiloidului beta, inhiband depunerea sa sub forma de placi senile in boala Alzheimer.

 

Transtiretina TTR (prealbumina) este o proteina prezenta in ser si LCR cu rol in transportul tiroxinei T4 si al retinolului. In LCR este principalul transportor de T4, albumina, carrier-ul cel mai important din organism, fiind prezent aici in cantitati foarte mici. TTR mai este cunoscuta si sub denumirea de prealbumina deoarece pe electroforegrama prezinta o mobilitate mai mare decat cea a albuminei.

Din punct de vedere structural, este un homotetramer cu o masa moleculara de 55 kDa, sintetizat in ficat si plexul coroid. Fiecare monomer este alcatuit din 127 aminoacizi si are o structura secundara de tip beta. Exista 2 situs-uri de legare a tiroxinei pe fiecare tetramer.

TTR inhiba agregarea fragmentelor de beta amiloid si formarea placilor senile in boala Alzheimer.

 

Fractiunea Tau (transferina desialata) este o proteina specifica sistemului nervos,  cu rol de stabilizare a microtubulilor. Fractiunea Tau este absenta in dendrite, fiind prezenta numai in portiunea distala a axonului. Exista doua cai de control a stabilitatii microtubulilor: prezenta mai multor izoforme si fosforilarea.

Literatura de specialitate citeaza prezenta a 6 izoforme deosebite prin numarul domeniilor de legare: trei dintre izoforme au 3 domenii de legare, restul cate 4 domenii de legare, toate aflate la portiunea carboxiterminala.

Fosforilarea are loc sub actiunea kinazelor, in special PKN (serine/treonin kinaza). Activarea PKN initiaza procesul de fosforilare si dezorganizarea structurii microtubulare.

In patologie, cresterea fractiunii Tau si tau fosforilat se intalneste in boala Alzheimer si in tauopatii, o clasa de afectiuni neurologice degenerative ce constau in agregarea proteinei Tau in creier.

 

Metode de determinare

Markerii degenerescentei neuronale se dozeaza din LCR (lichidul cefalorahidian), cel mai adesea prin tehnici ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assays).

Determinarea lor este posibila acum si prin tehnici electroforetice, utilizand kit-ul Hydragel HR SEBIA Franta in sistemele automate Hyrys-Hydrasys sau Hydrasys 2 Scan. Dozarea se face din LCR, dupa o prealabila concentrare. Pentru cazurile cu proteinorahie mare, concentrarea LCR nu este obligatorie, putandu-se utiliza si LCR neconcentrat.

 

Electroforeza de inalta rezolutie a proteinelor din LCR ofera o serie de avantaje fata de tehnicile ELISA, in special legate de posibilitatea determinarii simultane a unui numar mare de proteine pornind de la o cantitate mica de LCR. Tehnicile ELISA permit exclusiv determinarea punctuala a unui singur marker.

Pe de alta parte, cazurile asimptomatice si diagnosticul precoce ale bolii necesita o imagine de ansamblu asupra mai multor proteine implicate in patologia sistemului nervos. Acest lucru se poate realiza numai prin electroforeza de inalta rezolutie a proteinelor din LCR ce permite identificarea simultana a 10-15 fractiuni de interes. Cele mai importante proteine care pot fi analizate electroforetic sunt: prealbumina (transtiretina), albumina, fractiunea tau (in zona de mobilitate beta globulinica)  si cisteina (in zona de mobilitate gama globulinica).

 

Electroforeza de inalta rezolutie sau ELISA? Ce alegem?

Este o intrebare fireasca si, totodata frecventa.

Electroforeza este recomandata ca prim test pentru pentru imaginea de ansamblu pe care o poate oferi asupra fractiunilor proteice modificate in LCR si pentru orientarea catre o eventuala determinare cantitativa prin ELISA a fractiunilor modificate.

Determinarea cantitativa prin ELISA nu este, insa, obligatorie, electroforeza de inalta rezolutie a proteinelor din LCR permitand atat separarea si identificarea proteinelor de interes in bolile degenerative neuronale, cat si cuantificarea acestora cu acuratete.

Electroforeza HR este asadar recomandata datorita numeroaselor avantaje:

-         grad de rezolutie mare

-         specificitate si sensibilitate mare conferita de utilizarea Violetului acid, un colorant cu afinitate mare pentru fractiunile hipoproteice

-         posibilitatea separarii si cuantificarii simultane a unui numar mare de fractiuni intr-un timp scurt (1h)

 

 

In ce afectiuni este recomandata determinarea electroforetica a markerilor de degenerescenta neuronala?

-         boala Alzheimer

-         boala Parkinson

-         scleroza laterala amiotrofica

-         polineuropatia amiloida familiala

-         depresia majora

-         alte tauopatii (boli degenerative ale sistemului nervos central determinate de acumulare de proteine Tau la nivelul creierului):

*      paralizia supranucleara progresiva

*      dementa pugilistica

*      panencefalita sclerozanta subacuta

 

 

Referinte bibliografice

1.Vranova HP et al – CSF markers of neurodegeneration in parkinson’s disease- J Neural Transm 2010 117;1177-1181.

2.Andreasen N et al- Cerebrospinal fluid tau protein as a biochemical marker for Alzheimer's disease: a community based follow up study- J Neurol Neurosurg Psychiatry, 1998; 64: 298-305.

3.Tsuji -Akimoto S et al- Cystatin C in cerebrospinal fluid as a biomarker of ALS- Neurosci Lett, 2009, 6:452 (1):52-5.

 

Noutati


























Actualitati Medicale




















 

Introdu adresa ta de email pentru a te alatura noua.

 
Proiect realizat de AB T&Co              © Toate drepturile rezervate Electroforeza.ro 2009